[发明专利]一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法在审
| 申请号： | 201911112419.5 | 申请日： | 2019-11-14 |
| 公开（公告）号： | CN110714067A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 张培东;吴畏;覃小桓 | 申请（专利权）人： | 南方医科大学珠江医院 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 11589 北京劲创知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 徐家升 |
| 地址： | 510000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法，包括如下步骤：构建CITED2基因过表达VECs,并分为NMN干预组和对照组，NMN干预组给予NMN进行孵育，对照组则进行常规培养；对NMN干预组和对照组均进行划痕实验、Transwell实验和成管实验；构建CITED2基因过表达小鼠模型，并分为NMN治疗组和常规喂养对照组，检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；基于实验、检测及观察数据，进一步的利用RT‑qPCR和WB，检测细胞和心肌组织的CITED2蛋白和基因表达水平。本发明实现了CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的实验，且整个实验过程程序简单，便于进行操作，进而有利于进行推广运用。 | ||
| 搜索关键词： | 基因过表达 治疗 构建 干预 检测 喂养 基因表达水平 常规培养 高龄小鼠 划痕实验 实验过程 体外实验 小鼠模型 心肌组织 孵育 蛋白 细胞 观察 | ||
【主权项】：
1.一种CITED2异常打开与NMN治疗的相关性的体外实验法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1：构建CITED2基因过表达VECs,并分为NMN干预组和对照组，NMN干预组给予NMN进行孵育，且一天更换一次，对照组则进行常规培养；/nS2：对步骤S1中的NMN干预组和对照组均进行划痕实验、Transwell实验和成管实验，在所述划痕实验中，观察NMN干预组和对照组的细胞增殖的时间和速度，在Transwell实验中，观察NMN干预组和对照组的中迁移的HUVECs数量即细胞迁移现象，在成管实验中，检测NMN干预组和对照组中HUVECs形成微管网密度及分支点个数即成管密度；/nS3：构建CITED2基因过表达小鼠模型，并分为NMN治疗组和常规喂养对照组，NMN治疗组通过饮用水给予NMN喂食高龄小鼠，持续1个月后，针对NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠，利用免疫荧光和激光共聚焦显微镜技术，检测每个高倍视野下的微管数目和微管/肌纤维比，并通过NT-proBNP和心脏彩超检测NMN治疗组和常规喂养对照组的高龄小鼠的心功能；/nS4：基于步骤S2和S3的实验、检测及观察数据，进一步的利用RT-qPCR和WB，检测细胞和心肌组织的CITED2蛋白和基因表达水平。/n
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