[发明专利]一种鳗用植物源免疫增强型饲料添加剂的筛选方法在审
| 申请号： | 201911120013.1 | 申请日： | 2019-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN110714048A | 公开（公告）日： | 2020-01-21 |
| 发明（设计）人： | 李忠琴;翟少伟;杨求华;江兴龙 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;C12N5/078 |
| 代理公司： | 35203 厦门市新华专利商标代理有限公司 | 代理人： | 朱凌 |
| 地址： | 361000 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明提供一种鳗用植物源免疫增强型饲料添加剂的筛选方法，步骤如下：配制植物源提取物药液，然后用非连续密度梯度离心法制备鳗鱼血浆白细胞溶液；再利用酶标仪和流式细胞仪分别测定血浆白细胞的呼吸爆发活性和吞噬活力，结合计算公式评价植物源提取物对鳗鱼血浆白细胞的激活作用。本发明一次性可以同时完成多种植物源药液的高中低3个浓度的细胞活性效应测试，为植物源提取物在水产养殖中的应用及渔药研制提供高效筛选技术参考。 | ||
| 搜索关键词： | 白细胞 血浆 植物源提取物 鳗鱼 植物源 密度梯度离心 流式细胞仪 免疫增强型 饲料添加剂 高效筛选 技术参考 计算公式 评价植物 细胞活性 效应测试 非连续 酶标仪 提取物 一次性 再利用 渔药 水产养殖 配制 激活 筛选 呼吸 应用 | ||
【主权项】：
1.一种鳗用植物源免疫增强型饲料添加剂的筛选方法，其特征在于：所述方法步骤如下：/n1)植物源提取物药液配制：/n将植物药材经超微粉碎机研磨，收集药粉；然后按照料液比1:10的比例将药粉与有机溶液混匀，用超声波破壁仪处理，过滤后收集滤液，将滤液蒸发浓缩后制得植物源提取物浸膏；/n称取适量植物源提取物浸膏加DMSO溶液(5％V/V)混匀，在恒温50℃振荡仪中浸泡提取，然后用离心机离心，用无菌滤膜过滤上清液，制成植物源提取物药液；/n2)鳗鱼血浆白细胞制备：/n用生理盐水将Percoll分离液配制成30％和40％浓度的非连续密度梯度分离液，分别取适量分离液于不同的离心管中，沿管壁小心缓慢加入鳗鱼血液样品，每个密度重复三管，室温离心，取上清混匀，等体积加入细胞培养基，制成白细胞悬液；/n3)鳗鱼白细胞氧呼吸爆发活性检测：/n在96孔板中，每一行为一组，每组分为L、N
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