[发明专利]一种创制枯萎病抗性西瓜种质材料的方法有效
| 申请号： | 201911128274.8 | 申请日： | 2019-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN110760538B | 公开（公告）日： | 2022-12-02 |
| 发明（设计）人： | 张曼;羊杏平;徐锦华;刘广;姚协丰;任润生;徐建;娄丽娜 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/29;A01H5/00;A01H5/10;A01H6/34 |
| 代理公司： | 北京惠科金知识产权代理有限公司 11981 | 代理人： | 瞿晓晶 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种创制枯萎病抗性西瓜种质材料的方法，属于分子育种技术领域，首先针对西瓜的Clpsk1基因的第一个外显子，设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，然后构建含有编码所述sgRNA序列的DNA片段的pRGEB32‑CAS9‑gRNA‑Clpsk1载体；利用农杆菌介导法将基因编辑载体导入受体西瓜品种苏蜜1号，获得转化植株；对转化植株进行Clpsk1基因编辑检测和枯萎病抗性鉴定，所得阳性植株即为具有枯萎病抗性的西瓜种质材料。本发明方法可快速高效地获得西瓜抗病新种质，极大地缩短了育种周期，提高了育种效率，获得的材料不含有任何外源基因，除提高了西瓜抗枯萎病的能力，其他农艺性状不受影响。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 创制 枯萎病 抗性 西瓜 种质 材料 方法 | ||
【主权项】：
1.一种创制枯萎病抗性西瓜种质材料的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)针对西瓜的Clpsk1基因的第一个外显子，设计基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列，所述sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；/n(2)构建含有编码所述sgRNA序列的DNA片段的pRGEB32-CAS9-gRNA-Clpsk1载体；/n(3)利用农杆菌介导法将pRGEB32-CAS9-gRNA-Clpsk1基因编辑载体导入受体西瓜品种苏蜜1号，获得转化植株；/n(4)转化植株用Cas9基因和潮霉素基因的特异性引物进行第一轮扩增，同时扩增出Cas9基因和潮霉素基因的植株，再用Clpsk1基因靶标序列侧翼引物进行第二轮扩增，将PCR产物进行测序，通过峰图筛选出sgRNA作用位点发生突变的植株，即为突变体植株；/n(5)将步骤(4)中鉴定出的突变体植株的T0代株系，自交收获T1代种子，用枯萎病菌孢子悬浮液侵染T1代植株，表现为抗病的植株即为具有枯萎病抗性的西瓜种质材料。/n
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