[发明专利]一种吐纳麝香诱导人正常肝细胞恶性转化模型的建立方法

摘要

本发明适用于细胞生物学领域，提供了一种吐纳麝香诱导人正常肝细胞恶性转化模型的建立方法，包括：配制吐纳麝香工作液；培养L02人体正常肝细胞至对数期后分成转化组和对照组；用吐纳麝香处理转化组细胞；将处理后的转化组细胞、对照组细胞培养至20代，通过软琼脂糖克隆实验检测细胞锚着独立生长能力，再通过划痕实验检测细胞愈合和迁移能力。本发明提供的建立方法，通过软琼脂克隆实验可在转化组观察到体积较大且边缘整齐的克隆细胞团，通过划痕实验可观察到转化组克隆细胞较对照组细胞的划痕愈合更快，细胞迁移能力更强，不但有效验证吐纳麝香对人体具有致癌效应，还为吐纳麝香毒性效应的研究提供了参考依据；且该方法操作简单、方便、费用低廉。

主权项

1.一种吐纳麝香诱导人正常肝细胞恶性转化模型的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括：/n(1)配制吐纳麝香工作液备用，所述吐纳麝香工作液浓度分别为：10μg/L、100μg/L、1000μg/L；/n(2)培养L02人体正常肝细胞至对数期备用；/n(3)将所述对数期的L02人体正常肝细胞分为四组，分别为对照组细胞和三组转化组细胞，其中所述三组转化组细胞分别用配制好的所述10μg/L、100μg/L、1000μg/L的吐纳麝香工作液处理24h，同时用含有等体积DMSO的DMEM培养液处理所述对照组细胞24h；/n将所述处理后的所述对照组细胞和经步骤(3)中所述10μg/L、100μg/L、1000μg/L的吐纳麝香工作液处理的转化组细胞正常培养至第20代；/n(4)取上述步骤(3)中正常培养基培养过程中的第10、15、20代的对照组细胞和转化组细胞，形成对照组细胞、转化组细胞，进行软琼脂糖克隆实验；/n(5)观察所述转化组细胞形成细胞集落的情况，并从经所述1000μg/L吐纳麝香工作液处理的转化组的第20代细胞的琼脂层中选取符合预期大小的克隆细胞团于6孔板上进行培养；/n分别取上述步骤(5)中转化组的所述符合预期大小的克隆细胞和上述步骤(3)中对照组的第20代细胞进行划痕实验，检测划痕后的转化组细胞的愈合和迁移能力。/n