[发明专利]一种利用CRISPR-Cas9系统对间充质干细胞定点敲入外源基因的方法在审
申请号: | 201911233881.0 | 申请日: | 2019-12-05 |
公开(公告)号: | CN110951693A | 公开(公告)日: | 2020-04-03 |
发明(设计)人: | 崔俊生;王本旭;刘树涛 | 申请(专利权)人: | 北京兴元和济生命医学科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/10 | 分类号: | C12N5/10;C12N15/864;C12N15/90;C12N15/12;A61K35/28;A61P19/02;A61P29/00;A61P19/08 |
代理公司: | 北京方安思达知识产权代理有限公司 11472 | 代理人: | 陈琳琳;武玥 |
地址: | 102300 北京*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及生物技术领域,具体地,涉及一种利用CRISPR‑Cas9系统对间充质干细胞定点敲入外源基因的方法。所述方法包括以下步骤:1)构建包含外源基因的载体质粒,并且针对人的AAVS1位点设计构建AAVS1sgRNA/Cas9质粒;2)将包含外源基因的载体质粒和AAVS1sgRNA/Cas9质粒混合,将混合物转染间充质干细胞,将外源基因定点敲入间充质干细胞基因的AAVS1位点。本发明根据人的IL1R1、IL1R2、IL1Ra、TNFR1、TNFR2基因,构建基于CRISPR‑Cas9系统的同源重组质粒,然后将携带CRISPR‑Cas9质粒,将含外源基因的质粒共转染受体细胞,从而获得能够分泌表达外源基因所对应蛋白的间充质干细胞。获得的间充质干细胞持续表达上述蛋白,抑制体内IL‑1β或TNF‑α与其受体结合,从而抑制体内炎症进行,缓解或治疗类风湿性关节炎或骨关节炎。 | ||
搜索关键词: | 一种 利用 crispr cas9 系统 间充质 干细胞 定点 敲入外源 基因 方法 | ||
【主权项】:
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