[发明专利]一种体外N6-甲基腺嘌呤修饰乙型肝炎病毒的方法在审
| 申请号： | 201911283734.4 | 申请日： | 2019-12-13 |
| 公开（公告）号： | CN111057703A | 公开（公告）日： | 2020-04-24 |
| 发明（设计）人： | 张华堂;唐雨微;赵中华;魏青绿 | 申请（专利权）人： | 重庆市科学技术研究院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N7/00;C12R1/93 |
| 代理公司： | 重庆市前沿专利事务所(普通合伙) 50211 | 代理人： | 郭丽 |
| 地址： | 401123 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种体外6mA修饰HBV的方法，包括如下步骤：(1)构建pEASY‑HBV阳性质粒：将HBV克隆至pEASY‑Blunt载体获得pEASY‑HBV阳性质粒；(2)制备HBV cccDNA：以pEASY‑HBV质粒为模板，采用PCR扩增方法，获得HBV DNA扩增产物；将扩增产物进行酶切反应，再进行环化反应，获得HBV cccDNA；(3)提取人肝癌细胞HepG2核蛋白：分离HepG2细胞胞质蛋白和核蛋白，收集HepG2核蛋白；(4)体外6mA甲基化修饰HBV cccDNA：以HepG2核蛋白为酶，SAM为甲基供体，HBV cccDNA为底物，在35‑39℃条件下孵育10‑15小时，进行体外6mA甲基化修饰。本发明提供的方法，操作简单，首次成功在体外进行了6mA甲基化修饰HBV cccDNA，能够大量获得6mA修饰的HBV cccDNA产物，为乙型肝炎病毒的研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 体外 n6 甲基 嘌呤 修饰 乙型肝炎 病毒 方法 | ||
【主权项】：
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