[发明专利]利用高保真聚合酶与UDG的基因克隆与定点突变方法在审
| 申请号： | 201911357763.0 | 申请日： | 2019-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN110964737A | 公开（公告）日： | 2020-04-07 |
| 发明（设计）人： | 袁慧;田文齐 | 申请（专利权）人： | 苏州博睐恒生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66 |
| 代理公司： | 苏州言思嘉信专利代理事务所(普通合伙) 32385 | 代理人： | 刘巍 |
| 地址： | 215000 江苏省苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种利用高保真聚合酶与UDG的基因克隆与定点突变方法，包括步骤为：用dU修饰引物和dU耐受型高忠实性DNA聚合酶扩增目标基因和质粒载体；用热稳定性尿嘧啶DNA糖苷酶高温处理，得到3’端为单链的目标基因和质粒载体；将二者混合，使目标基因和质粒载体的两端单链区发生配对连接起来，形成含目标基因的带缺口环状重组质粒载体；含目标基因的带缺口环状重组质粒载体转化大肠杆菌后，缺口被修复好，得到含目标基因的完整重组质粒载体。采用上述方法显著提高了扩增反应的忠实性，避免了低忠实性的Taq DNA聚合酶导致的额外基因突变，尤其适用于进行蛋白表达为目的的载体构建；dU与dA碱基配对，配对结果等同于正常的dT/dA配对，避免了修饰碱基引入额外错误碱基导致的基因突变；热稳定性UDG在60‑80度仍具有酶活性，使得dU碱基的去除与DNA链的断裂同时进行，省略了加碱热裂解操作。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 高保真 聚合 udg 基因 克隆 定点 突变 方法 | ||
【主权项】：
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