[发明专利]一种质粒构建试剂盒、质粒构建方法及其应用

摘要

本发明提供了一种质粒构建试剂盒、质粒构建方法及其应用，所述试剂盒包括待组装的DNA片段Fn和载体；所述载体包括中间载体和/或组装载体；所述试剂盒还包括大肠杆菌，所述大肠杆菌含有λ噬菌体Red重组系统的质粒。本发明采用体外组装和体内组装相结合的方式，首先采用重组酶体系将大片段DNA与组装载体在体外进行组装，再将体外组装产物转化入含有λ噬菌体Red重组系统质粒的大肠杆菌中进行体内组装，构建的试剂盒结合了体外组装和体内组装的优点，并采用λ噬菌体Red重组系统增强大肠杆菌的体内组装能力，加快了质粒合成速率，显著提高了质粒的合成成功率。