[发明专利]基于可检测标签与靶蛋白的CRISPR/Cas控制的整合而选择细胞的方法

摘要

本文报道了一种用于提供表达来自标志物蛋白与细胞内源靶蛋白的融合蛋白的细胞的方法，所述方法由以下步骤组成：a)用以下项转染所述细胞：i)额外含有核酸的Cas9编码质粒，所述核酸对于第一选择试剂具有抗性，ii)含有第一核酸和第二核酸的环状供体质粒，所述第一核酸赋予对于第二选择试剂的抗性，所述第二核酸编码所述标志物蛋白并且其3'和5'侧翼具有与所述细胞中的整合位点同源的核酸，iii)合适的合成crRNA，和iv)合适的合成tracrRNA；b)在存在所述第一选择试剂和所述第二选择试剂的情况下培养所述细胞；以及c)选择在步骤b)的条件下进行细胞分裂的细胞，并且由此提供/生产表达标志物蛋白与细胞内源靶蛋白的融合蛋白的细胞。