[发明专利]一种单链DNA肽连接酶sDPlaseI及其使用方法

摘要

本发明提供了一种新型的可用于催化特定单链DNA和特定多肽共价连接的单链DNA肽连接酶sDPlaseI及其酶学特性和使用方法。sDPlaseI酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，对应的基因编码序列如SEQ ID NO：3所示；sDPlaseI酶可以识别5’末端起始为5’‑ATGATCCAG‑3’序列且其5’末端脱氧核糖核苷酸A为磷酸化状态的特定DNA单链和C末端起始为N’‑MANCEHL‑C’这7肽的特定多肽链，并催化这两者以共价键相互连接在一起；单链DNA和多肽连接产物在358nm波长处有特征吸收峰，可用于sDPlaseI连接酶反应活性的测定。sDPlaseI连接酶缓冲液是由pH为7.5的500mM Tris‑Hcl、100mM Mg2+、10mM ATP和10mM DTT组成，其最适反应的温度范围是30℃‑40℃，连接反应时间为5min‑15min。本发明提供的全新的单链DNA多肽连接酶，可以作为基因工程和基因分析的工具酶。