[发明专利]一种基于CRISPR-Cas13a系统检测微生物的方法及应用

摘要

本发明涉及一种基于CRISPR‑Cas13a检测微生物的方法，首先对待测细菌进行前处理，提取其基因组，通过PCR扩增以及体外转录两步得到RNA，称作target RNA。当target RNA存在时可以激发Cas13a‑crRNA复合物的附属切割能力，即切割无关单链RNA。在此RNA一端修饰荧光基团，另一端修饰淬灭基团。当Cas13a‑crRNA复合物检测到相应的Target RNA时，能够切割荧光探针，导致荧光值增加，荧光值的增长与待测细菌存在线性对应关系，利用此来检测微生物。本方法具有出色的可靠性、极高的灵敏性、高度的特异性、易于实施和检测所需时间短的特点，其对微生物的检测具有巨大潜力。