[发明专利]基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法在审
| 申请号： | 202010117029.3 | 申请日： | 2020-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN111394379A | 公开（公告）日： | 2020-07-10 |
| 发明（设计）人： | 邓文生;史开拓 | 申请（专利权）人： | 武汉科技大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70 |
| 代理公司： | 成都方圆聿联专利代理事务所(普通合伙) 51241 | 代理人： | 苟铭 |
| 地址： | 430081 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供基于重组酶和超保真DNA聚合酶的大载体DNA的定点突变方法，包括：(1)，设计两对引物，其中一对为突变引物即MPF和MPR，这对引物的5'端互补序列长度为12‑15bp，互补区可以任意引入单点或多点突变，任意长度的缺失突变，插入突变1‑20bp；另一对引物是协助PCR的引物，由于这一对引物的位置可以设置在已知序列区内，是可变动的，可以在突变位点的前面或后面设置，称之为PCR可变引物PCRVF和PCRVR；(2)聚合酶链式反应设置和产物纯化；(3)重组酶连接反应；(4)转化，质粒提取和测序分析。本发明可在其互补区域取任意置换碱基，进行任意长度的缺失突变，长片段拆入突变，可以用于大载体DNA定点突变而且表现出很高突变效率。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 重组 保真 dna 聚合 载体 定点 突变 方法 | ||
【主权项】：
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