[发明专利]一种利用CRISPR-Cas9技术敲除大肠杆菌中胞苷脱氨酶基因cdd的方法及应用在审
申请号: | 202010150058.X | 申请日: | 2020-03-06 |
公开(公告)号: | CN111321101A | 公开(公告)日: | 2020-06-23 |
发明(设计)人: | 王昕;王静;陈可泉;马琛;秦航;欧阳平凯 | 申请(专利权)人: | 南京工业大学 |
主分类号: | C12N1/21 | 分类号: | C12N1/21;C12N15/90;C12N15/70;C12N15/55;C12R1/19 |
代理公司: | 南京先科专利代理事务所(普通合伙) 32285 | 代理人: | 叶帅东 |
地址: | 210000 江苏省南*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种利用CRISPR‑Cas9技术敲除大肠杆菌中胞苷脱氨酶基因cdd的方法及应用。包括以下步骤:1制作含有Cas9质粒的大肠杆菌BL21(DE3)感受态;2、设计合成突变sgRNA;3、构建Donor DNA;4、将sgRNA质粒与Donor DNA采用电转化法转化至携带Cas9质粒的大肠杆菌感受态中,敲除cdd基因;5、将目标质粒pET28a‑UCK导入敲除菌株生产胞苷酸;本发明具有操作简便、cdd基因敲除成功率高且敲除菌株对底物转化率提高,适合工业化生产胞苷酸等优点。敲除菌株生产胞苷酸相较于未敲除菌株,其对底物胞苷以及ATP的转化率提高了15%,达到99%。 | ||
搜索关键词: | 一种 利用 crispr cas9 技术 大肠杆菌 中胞苷 脱氨酶 基因 cdd 方法 应用 | ||
【主权项】:
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