[发明专利]一种高效的CRISPR RNP和供体DNA共位介导的基因插入或替换方法及其应用有效
| 申请号： | 202010439225.2 | 申请日： | 2020-05-22 |
| 公开（公告）号： | CN111575319B | 公开（公告）日： | 2022-04-08 |
| 发明（设计）人： | 刘文华;朱庆锋;陈庄;陈中健;刘圣杰;吴秀菊;戴彰言 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 |
| 主分类号： | C12N15/90 | 分类号： | C12N15/90;C12N9/22;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70 |
| 代理公司： | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人： | 刘瑜 |
| 地址： | 510640 广东省广州*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种高效的CRISPR RNP和供体DNA共位介导的基因插入或替换方法及其应用。该方法包括如下步骤：(1)将供体DNA进行生物素标记，得到生物素标记的供体DNA；(2)将Cas9蛋白与单价链霉亲和素的融合蛋白，sgRNA和生物素标记的供体DNA混合均匀，静置，得到CRISPR RNP‑供体DNA复合体；(3)将CRISPR RNP‑供体DNA复合体进行细胞核转化，实现基因插入或替换。本发明中利用该融合蛋白能结合生物素标记供体DNA的特性，使CRISPR RNP和供体DNA共同出现在目标位点，实现供体DNA在目标位点的精准插入或对目标位点基因的精准替换，适用于农作物和家畜育种方面。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 高效 crispr rnp 供体 dna 共位介导 基因 插入 替换 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
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