[发明专利]一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA-LFS快速检测方法的建立及应用

摘要

本发明公开了一种AHPND致病性副溶血弧菌RPA‑LFS快速检测方法的建立及应用，包括引物筛选，引物种间特异性检测，探针设计及筛选，RPA‑LFS种间特异性检测，RPA‑LFS反应温度检测，RPA‑LFS反应时间检测，RPA‑LFS最低检出限测定，引物探针筛选探针长度46bp，探针5’末端用FITC进行标记，3’末端引入3C‑spacer进行末端封闭，在探针中间引入THF，即无嘌呤无嘧啶位点(AP位点)，AP位点前至少要保留30bp的碱基，AP位点之后至少有15bp的碱基，下游引物的5’末端标记生物素，探针和下游引物扩增产物的一端带有FITC，另一端带有生物素。本发明解决设备依赖性问题，解决检测周期长的问题，对操作人员实验技能要求简单。