[发明专利]一种双gRNA-pTargetF质粒的构造方法在审
| 申请号： | 202010950403.8 | 申请日： | 2020-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN112011562A | 公开（公告）日： | 2020-12-01 |
| 发明（设计）人： | 刘振云;王旭;程丰伟;郭涛;倪磊 | 申请（专利权）人： | 苏州一兮生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12N15/66;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京科家知识产权代理事务所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 宫建华 |
| 地址： | 215228 江苏省苏州市吴江区盛*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种双gRNA‑pTargetF质粒的构造方法，该双gRNA‑pTargetF质粒的构造方法基于Gibson Assembly介导。进行Gibson Assembly时，连接三个片段，所连接的三个片段每两个片段之间的重叠序列含有15‑30个碱基，每个片段使用了0.33pmol的量，共1pmol；之后的50℃水浴时间选择了45min；本发明含有双gRNA的pTargetF质粒能为之后的CRISPR‑Cas9基因编辑提高了效率，简化了实验操作。同时在设计长引物时添加了一些酶切位点(列如Spe Ⅰ,Acc65 Ⅰ)，更加有利于基因编辑的酶切连接的实验设计和操作。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 grna ptargetf 质粒 构造 方法 | ||
【主权项】：
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