[发明专利]一种重组限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法在审
申请号: | 202011210217.7 | 申请日: | 2020-11-03 |
公开(公告)号: | CN112359054A | 公开(公告)日: | 2021-02-12 |
发明(设计)人: | 雍金贵;雍德祥;李森;张伦 | 申请(专利权)人: | 安徽环球基因科技有限公司 |
主分类号: | C12N15/70 | 分类号: | C12N15/70;C12N15/62;C12N9/22 |
代理公司: | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人: | 周卫 |
地址: | 239000 *** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明公开了一种重组限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法,本发明通过重组方式将带有SUMO标签的Sac I限制性内切酶与甲基化酶克隆到含His标签的pCreat Duet共表达载体中,在低温条件下表达量达到25%,通过Ni柱亲和层析、Superdex200凝胶过滤层析得到高活力的重组Sac I限制性内切酶,比活较商业化酶更高,通过Superdex200分子筛层析对蛋白进行提纯,经纯化工艺摸索及条件优化,整个纯化过程仅需6‑7h,极大简化了纯化过程及时间,从而保证了酶活性,有利于酶产量的提高,为研发及生产其他Ⅱ型限制性内切酶奠定了基础。 | ||
搜索关键词: | 一种 重组 限制性 内切酶 大肠杆菌 中的 生产 方法 | ||
【主权项】:
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