[发明专利]一种重组hEGF在毕赤酵母中的生产方法在审
| 申请号： | 202011210233.6 | 申请日： | 2020-11-03 |
| 公开（公告）号： | CN112358537A | 公开（公告）日： | 2021-02-12 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;王方平;潘楠;鲍伟 | 申请（专利权）人： | 安徽环球基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/485 | 分类号： | C07K14/485;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/84 |
| 代理公司： | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 周卫 |
| 地址： | 239000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组hEGF在毕赤酵母中的生产方法，包括如下步骤：步骤S1：重组质粒构建；步骤S2：感受态细胞制备；步骤S3：质粒的线性化；步骤S4：电转化；步骤S5：阳性克隆的菌落PCR鉴定及克隆的小量转接；步骤S6：阳性克隆的诱导及小量表达测试；步骤S7：放大纯化；在基因合成的过程中对hEGF的基因进行了密码子的优化，且后期的表达小试进行了最优克隆的筛选及最优表达时间的优化，因此极大地提高了该蛋白的表达量，缩短了蛋白质纯化时间至2h，极大地保障了蛋白活性；通过将重组hEGF质粒转化至毕赤酵母GS115宿主细胞中，利用甲醇诱导，最终通过离子交化层析得到高纯度的目的蛋白。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 hegf 酵母 中的 生产 方法 | ||
【主权项】：
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