[发明专利]一种重组切刻限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法在审
| 申请号： | 202011216414.X | 申请日： | 2020-11-04 |
| 公开（公告）号： | CN112280763A | 公开（公告）日： | 2021-01-29 |
| 发明（设计）人： | 雍金贵;雍德祥;李森;张伦 | 申请（专利权）人： | 安徽环球基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/16 | 分类号： | C12N9/16;C12N15/55;C12N15/70 |
| 代理公司： | 合肥正则元起专利代理事务所(普通合伙) 34160 | 代理人： | 周卫 |
| 地址： | 239000 *** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种重组切刻限制性内切酶在大肠杆菌中的生产方法，通过重组方式将NT.BstNBI切刻酶以及GST标签克隆到含His标签的pACYCDuet‑1表达载体中，其甲基化酶克隆到含阿拉伯糖诱导元件的pBAD‑HisA中利用阿拉伯糖先进行甲基化酶表达保护菌体自身DNA，在低温条件下表达量达到35％。通过组合型标签蛋白表达、Ni柱亲和层析、Superdex 200凝胶过滤层析得到高活力的重组NT.BstNBI切刻酶，用Superdex 200分子筛层析对蛋白进行提纯，经纯化工艺摸索及条件优化，整个纯化过程仅需6h，加上酶切时间也不过20小时,极大简化了纯化过程及时间。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 限制性 内切酶 大肠杆菌 中的 生产 方法 | ||
【主权项】：
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