[发明专利]一种ARMS-TaqMan Blocker体系的Blocker设计和筛选方法

摘要

本发明公开了一种ARMS‑TaqMan Blocker体系的Blocker设计和筛选方法，设计方法将Blocker设计在突变位点处，覆盖突变位点即可；Blocker与野生型模板完全匹配，完全匹配的Tm值高于ARMS引物与野生型模板匹配的Tm值，允许熔点差低于5℃；Blocker与突变型模板不完全匹配，不完全匹配的Tm值与ARMS引物跟突变型模板的Tm值一致或接近；Blocker的3’末端添加多个与模板不匹配的无关碱基；筛选方法为，按照上述Blocker设计原则设计3‑10条Blocker，使这些Blocker与突变型模板匹配的Tm值在ARMS引物跟突变型模板匹配的Tm值附近呈现逐步升高的梯度，然后经实时PCR验证梯度Blocker对体系灵敏度和特异性的影响，筛选出对灵敏度无影响且特异性最好的Blocker。本发明提供的Blocker设计和筛选方法降低成本的同时，提升了体系的特异性。