[发明专利]基于CRISPR/Cas9构建Fzd6-Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用有效
| 申请号： | 202110251516.3 | 申请日： | 2021-03-08 |
| 公开（公告）号： | CN112980880B | 公开（公告）日： | 2023-05-02 |
| 发明（设计）人： | 李明定;韩海军 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/12;A01K67/027 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 应孔月 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了基于CRISPR/Cas9构建Fzd6‑Q152E定点突变小鼠模型的方法及应用，通过比对发现不同物种中rs61753730所在的位置有一定的保守性，因此，在小鼠中靶向rs61753730所在的位置，即Q152E，设计并合成sgRNA、对应的引物以及Donor序列，构建sgRNA/Cas9表达载体，并将其线性化和纯化后进行体外转录，然后将sgRNA、Cas9mRNA以及Donor混合，一起显微注射到小鼠受精卵中，再将存活的受精卵移植到假孕母鼠子宫中，出生的小鼠为被编辑的F0代小鼠。经PCR和Sanger测序鉴定，将阳性的小鼠与野生型小鼠进行交配，获得F1代小鼠，最后将经鉴定为阳性的F1代杂合子小鼠进行交配，繁育所得后代即可获得纯合的Fzd6‑Q152E突变型和野生型的小鼠。该模型小鼠可用于研究rs61753730的生物学功能。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 crispr cas9 构建 fzd6 q152e 定点 突变 小鼠 模型 方法 应用 | ||
【主权项】：
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