[发明专利]一种Klotho+/-

摘要

本发明利用CRISPR/Cas9技术，构建成了Klotho+/‑基因缺失斑马鱼，具体步骤包括：1)根据Klotho基因序列，确定靶位点；2)制备gRNA；3)体外转录Cas9mRNA；4)将Cas9mRNA和gRNA混合，注射到单细胞期斑马鱼胚胎中；5)将F0胚胎饲养至性成熟；6)与野生型成鱼外交，筛选F0；7)选取可产生有效突变的F0自交，筛选F1。本发明构建的Klotho+/‑基因缺失斑马鱼可用于动脉硬化、骨质疏松症、高磷血症、血管和软组织钙化领域的研究。