[发明专利]基于悬浮细胞的CAR-CD19慢病毒制备工艺

摘要

本发明公开了一种基于悬浮细胞的CAR‑CD19慢病毒制备工艺，其包括以下步骤：S1复苏HEK293细胞，在国产培养基中进行适应性驯化培养；S2驯化培养良好的HEK293细胞建立细胞库；S3将HEK293细胞扩增至所需的密度；S4在四质粒系统中，对HEK293细胞进行转染；S5将CAR‑CD19慢病毒质粒转染48 h后，收获细胞培养上清，即可获得细胞活率达90%以上、滴度5×106 TU/mL以上的慢病毒收获液。本发明的CAR‑CD19慢病毒制备工艺，培养的慢病毒细胞其活率达90%以上，所获上清的慢病毒滴度达5×106 TU/mL以上，能大大降低细胞死亡释放出的杂质，从而为下游纯化减轻压力。