[发明专利]稳定表达Cas9蛋白的LLC-PK1细胞系及其构建方法在审
| 申请号： | 202110504164.8 | 申请日： | 2021-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN113234684A | 公开（公告）日： | 2021-08-10 |
| 发明（设计）人： | 俞婷;陈志飞;魏文康;贺东生;张晓爱;陈庄;刘文华;王志林;贝锦龙;王蕾;罗帝洲;陈中健;朱庆锋 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院农业生物基因研究中心 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N9/22;C12N15/867;C12R1/91 |
| 代理公司： | 广州独角熊知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 44580 | 代理人： | 张小黎 |
| 地址： | 510640 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 暂无信息 | 说明书： | 暂无信息 |
| 摘要： | 本发明公开了稳定表达Cas9蛋白的LLC‑PK1细胞系及其构建方法，所述LLC‑PK1细胞是猪近端肾小管上皮细胞LLC‑PK1为宿主细胞，转染含Cas9的慢病毒表达载体，经过5μg/mL的嘌呤霉素筛选得到的能够稳定表达Cas9蛋白的转化体，构建方法包括以下步骤：步骤一，pLentiCRISPRv2‑Blast无内毒素质粒制备；步骤二，慢病毒包装；步骤三，细胞转染；步骤四，多细胞克隆筛选；步骤五，单细胞克隆筛选；本发明所筛选出的LLC‑PK1‑Cas9过表达阳性多克隆细胞株包含完整的Cas9基因序列，LLC‑PK1‑Cas9EDG120过表达单克隆细胞株成功表达Cas9蛋白，本发明构建的LLC‑PK1细胞系既可以用于筛选特异基因缺失或插入的基因组编辑细胞系，还可以为研究特异基因功能或解析微生物与宿主细胞相互作用的信号通路提供新手段。 | ||
| 搜索关键词： | 稳定 表达 cas9 蛋白 llc pk1 细胞系 及其 构建 方法 | ||
【主权项】：
暂无信息
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