[发明专利]一种可动态调控7-脱氧胆固醇及维生素D3的酿酒酵母菌的构建方法及应用

摘要

本发明涉及一种可动态调控7‑脱氧胆固醇及维生素D3的酿酒酵母菌的构建方法及应用，所述构建方法包括以下步骤：S1、使用启动子GAL7控制酿酒酵母工程菌种mot3基因的表达，转化入原始酵母菌中构建第一酿酒酵母菌；S2、构建麦角甾醇动态调控的dCas9系统并提取构建的质粒；S3、人工合成融合基因片段gal80F‑loxT‑PTEF1‑DHCR24‑Tcyc1‑PGAP‑DIC‑TADH1‑gal80R，将其转化进入第一酿酒酵母菌，PCR验证后获得第二酿酒酵母菌；S4、将步骤S3中构建的质粒转化进入第二酿酒酵母菌中，经筛选后获得可动态调控生产7‑DHC的酿酒酵母菌。本发明所提供的构建方法构建的酿酒酵母菌，通过在不影响菌株生长状态的同时，利用酿酒酵母内源的甾醇调控系统，结合dCas9系统实现副产物的减少，7‑DHC的产量提升。