[发明专利]一种细菌第二信使分子环二核苷酸的制备方法

摘要

本发明涉及基因工程与生物化学技术领域，具体为一种运用同一种细菌源重组生物酶催化生成三种第二信使分子，即环二核苷酸c‑di‑GMP、c‑di‑AMP和3′3′‑cGAMP的方法。所述重组生物酶为重组霍乱弧菌二核苷酸环化酶DncV，即重组DncV酶。DncV的氨基酸序列如序列表的序列1所示。本发明利用基因工程学技术首先制备可溶性表达的重组霍乱弧菌二核苷酸环化酶DncV，然后利用生物化学方法以ATP、GTP或ATP和GTP为底物，该生物酶分别催化合成高活性、专一性的c‑di‑GMP、c‑di‑AMP或3’3’‑cGAMP，提供简单快速、成本低廉、条件温和、产率高以及可大规模生产三种CDNs的制备方法；同时提供一种能够鉴定重组DncV酶及其催化产物c‑di‑GMP、c‑di‑AMP或3’3’‑cGAMP生物学活性的方法。