[发明专利]一种植物双靶点CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 202110770783.1 | 申请日： | 2021-07-07 |
| 公开（公告）号： | CN113388635B | 公开（公告）日： | 2022-08-19 |
| 发明（设计）人： | 熊兴鹏;程文翰;胡玉婷;高莹莹;余小林 | 申请（专利权）人： | 荆楚理工学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/55;C12N15/66 |
| 代理公司： | 深圳智趣知识产权代理事务所(普通合伙) 44486 | 代理人： | 崔艳峥 |
| 地址： | 448000 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种植物双靶点CRISPR/Cas9载体及其构建方法和应用，首先得到串联两个sgRNA表达框的中间载体；然后得到pBI121‑MCS‑Cas9；再设计包含两条sgRNA的引物，以所述中间载体为模板进行PCR；最后通过同源重组把PCR产物连入pBI121‑MCS‑Cas9中。通过上述制备方法可制备得到所述植物双靶点CRISPR/Cas9载体，以pBI121载体为骨架载体，依次连接有sgRNA表达框1、sgRNA表达框2和Cas9表达框。本发明的方法提高了双靶点CRISPR/Cas9载体构建的效率，获得所述中间载体和所述pBI121‑MCS‑Cas9载体后，仅需设计一对引物进行一步PCR和一步同源重组即可成功构建双靶点CRISPR/Cas9载体，方便快捷。另外，本发明一次反应仅需20元，只需合成带接头的一对引物，不需额外的引物及其他试剂，显著降低了成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 植物 双靶点 crispr cas9 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
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