[发明专利]EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备在审

专利信息
申请号: 202110882861.7 申请日: 2021-08-02
公开(公告)号: CN113583876A 公开(公告)日: 2021-11-02
发明(设计)人: 谷峰;程培培 申请(专利权)人: 中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
主分类号: C12N1/11 分类号: C12N1/11;C12N15/30;C12N15/90;C12R1/90
代理公司: 暂无信息 代理人: 暂无信息
地址: 200241 *** 国省代码: 上海;31
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摘要: 本发明公开EYFP敲入到Et.Actin基因的鸡柔嫩艾美尔球虫虫株的制备。该专利将FnCas12a蛋白,体外合成的crRNA和同源重组片段(含有P2A‑DHFR‑EYFP表达框的Et.Actin基因)利用Lonza 4D‑Nucleofector核转仪导入鸡柔嫩艾美尔球虫子孢子,实现对鸡柔嫩艾美尔球虫的编辑。将编辑虫株经过鸡体内乙胺嘧啶筛选,获得高纯度的基因编辑虫株。然后,利用PCR和Sanger测序技术对基因编辑虫株进行验证,证明EYFP成功标记了Et.Actin基因。通过细胞培养该虫株的子孢子并感染鸡后,取盲肠粘膜并涂片显示该EYFP在基因编辑虫株的整个生活史中都有表达。此基因编辑方法能够对鸡球虫的基因进行定点标记,有助于解析球虫基因的功能。本专利对新型抗球虫药物和疫苗的研发也具有重要意义。
搜索关键词: eyfp 敲入到 et actin 基因 柔嫩 艾美尔球虫虫株 制备
【主权项】:
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