[发明专利]一种肿瘤类器官专用冻存液在审
申请号: | 202110901828.4 | 申请日: | 2021-08-07 |
公开(公告)号: | CN113558043A | 公开(公告)日: | 2021-10-29 |
发明(设计)人: | 扈晖;郑维越;扈晓玉 | 申请(专利权)人: | 扈晖 |
主分类号: | A01N1/02 | 分类号: | A01N1/02 |
代理公司: | 暂无信息 | 代理人: | 暂无信息 |
地址: | 710048 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明涉及一种细胞冻存技术领域,尤其涉及一种肿瘤类器官专用冻存液及冻存方法。所述肿瘤类器官专用冻存液由DMEM/F12培养基、二甲基亚砜、胎牛血清及小分子抑制剂Y‑27632组成。具体构成比例为,每100mL专用冻存液包括70mL DMEM/F12培养基、10mL DMSO、20mL胎牛血清,小分子抑制剂Y‑27632的浓度为20‑40μM。肿瘤类器官传代后4~6天,生长大约在直径50‑100微米后,可以准备冻存。用移液器去除培养基,用枪头将含有肿瘤类器官的BME打散,无需使用胶原酶消化,加入预先解冻并置于2~8℃的所述专用冻存液,每孔加入500微升,混匀后转入1.5mL细胞冻存管中,使用细胞冻存盒或程控降温仪,逐步冷却至‑80℃,放入‑80℃冰箱,24小时后转入液氮罐中长期保存。通过添加小分子抑制剂可增加对肿瘤类器官细胞的保护作用,减少血清的比例可以减低成本,同时,在冻存前无需用胶原酶消化肿瘤类器官,也减少了对细胞的损伤,因此,冻存后复苏细胞生长良好,依然保持肿瘤类器官的特征性三维结构,且操作简单,为后续大规模冻存肿瘤类器官提供了便利条件。 | ||
搜索关键词: | 一种 肿瘤 器官 专用 冻存液 | ||
【主权项】:
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