[发明专利]细菌多糖与免疫原蛋白共价结合物的制备方法

摘要

共价修饰的细菌多聚糖和蛋白质；这种共价结合物是通过可以证明其共价性并有利于结合物纯化的双属间隔基把多聚糖和免疫原细菌膜蛋白或其它蛋白联结起来的；这种结合物是细菌疫苗的有用成分，及制备这种多聚糖，蛋白质和结合物的方法证明多聚糖与蛋白质间共价键的方法。

主权项

1、把有酸性基团的细菌荚膜多聚糖和免疫原蛋白通过含如下式的硫醚键双属间隔基结合制备多聚糖-蛋白质结合物的方法，A-E-S-B其中E是，R是H或-CH3；A是；这m是0到4；n是0到3；W是0或NH；Y是CH2，O，S，NR′或CHCO2H；这里R′是H或C1-或C2-的烷基；如果Y是CH2，那么m和n二者不能都为O或S，n也是大于1；而B是这里p是1到3，q是0到2；Z是，R′如上定义：该方法包括下列步骤：(1)有酸性基团的细菌荚膜多聚糖通过下列步骤加溶：(i)用大的疏水阳离子取代多聚糖的酸性基中的氢，生成多聚糖的盐；然后(ii)把多聚糖的盐溶在不含水，极性的质子惰性溶剂；(2)用一种双功能试剂活化多聚糖；(3)把这种活化的多聚糖与一个双一亲核试剂反应；(4)把这已与一种双一亲核试剂反应了的活化的多聚糖与一种产生亲电子部位的试剂反应，从而与侧面亲电子部位生成一种多聚糖。(5)使免疫蛋白单独地与一种产生硫醇基的试剂反应，与侧面硫醇基生成一种蛋白；然后(6)通过超速离心法把含有侧硫醇基的蛋白中分子量低的硫醇除去；然后(7)使具侧面亲电子部位的多聚糖与具侧面硫醇基的蛋白质反应，生成一种多聚糖一蛋白质结合体，它是通过共价的硫醚键使二者连接的，然后(8)把混合液离心，以除去非共价联结的多聚糖和蛋白质。