[发明专利]从蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法

摘要

本发明提供一种从江浙蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法。采用江浙蝮蛇毒经冻干成干粉，在4℃条件下完成下述步骤；(1)CM-ScphadcxC50柱层析；(2)ScphadcxG100凝胶过滤层析；(3)DEAE-ScphadcxA50层析；(4)高效液相色谱仪(FPLC)层析。该方法一次层析上样量大，分辨率高，有利于工业化生产，纯化的神经生长因子对酸、碱和温度有较好的稳定性。

主权项

1、一种从蛇毒中分离纯化神经生长因子的方法，其特征是采用江浙蝮蛇毒经冻干制成干粉，在4℃条件下完成以下四个层析步骤：(1)、CM-SephadexC50柱层析取江浙蝮蛇毒干粉溶解于PH6.4磷酸盐缓冲液中，离心除去不溶物，上清液上样于经上述缓冲液已平衡好的CM-Sep-hadexC50层析柱(2.6×50cm)，起始缓冲液洗去未吸附的杂蛋白，再用0-1MNacl直线梯度洗脱，按峰分别收集，测各峰蛋白浓度，然后测NGF的生物活性，将具有NGF生物活性的组份，透析除盐，冷冻干燥；(2)、SephadexG100凝胶过滤层析将第一步层析的NGF样品溶于PH7.0磷酸盐缓冲液中，上SephadexG100层析柱(2.6×95cm)，用同种缓冲液洗脱，按峰收集，测NGF的生物活性，将具有NGF生物活性的组份，透析除盐，冷冻干燥；(3)、DEAE-SephadexA50层析将SephadexG100具有NGF活性组份溶于Tris-Hcl，PH8.4缓冲液中，上样于DEAE-Sepha-dexA50层析柱(1.6×35cm)，0-0.5MNacl直线梯度洗脱，按峰收集。测NGF生物活性，将具有NGF活性，透析除盐，冻干；(4)、高效液相色谱仪(FPLC)层析取DEAE-SephadexA50层析的NGF组份溶于Tris-hcl，PH8.0缓冲液中，上FPLCMonoQHR5/5阴离子交换柱，用Nacl浓度梯度洗脱，收集NGF活性，除盐、冻干，即得纯化的神经生长因子。