[发明专利]聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法

摘要

本发明提供一种聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法。该方法采用临床标本前处理试剂盒中的试剂，对临床标本进行预处理和前处理，使结核菌DNA提取完全，将结核菌扩增前坚硬的类脂质细胞壁破坏掉，使DNA快速释放出来，与此同时对阳性、阻性标准质控物与临床标本也一同作相应前处理，并同时进行扩增，再以标准模板对比，来分析评价每次标本前处理的质量。它操作简便，节约试剂，明显提高标本前处理质量和降低成本，可使PCR全程结果稳定可靠。

主权项

1、一种聚合酶链反应查结核菌标本前处理新方法，其特征是采用临床标本进行预处理和前处理，同时对阳性标准质控物和阴性标准质控物作相应前处理，具体步骤是：a、预处理：将临床标本离心分离后，取上清液或沉淀物备用；b、前处理：取同体积的预处理标本、阳性标准质控物、阴性标准质控物分装各试管中，在各试管中分别加入十二烷基磺酸钠液、氢氧化钠液，其体积比均为20∶1∶1，于95-100℃下水溶15-20分钟，然后在各试管中分别加入与其总体积量相同的酚/氯仿液，反复颠倒混合均匀，在4℃下高速离心10分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中分别加入与水相体积相同的酚/氯仿液，再反复颠倒混合均匀，于4℃下高速离心10分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中分别加入与水相体积相同的氯仿/异戊醇液，反复颠倒混合均匀，4℃下高速离心10分钟后静止；静止分离后取各上层水相分移新试管中，在各试管中先分别加入水相体积1/10的醋酸钠，再分别加入其总体2-2.5倍的无水乙醇，混匀置入-20℃下冷冻12小时以上，最后在4℃下高速离心30分钟后，弃上清液，将各沉淀物分别加入三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠液20-50μl，混溶沉淀待扩增。