[发明专利]枯草蛋白酶309突变体吸附作用降低而水解作用增强

摘要

本发明涉及具有修饰的野生型枯草蛋白酶(309)氨基酸序列的枯草蛋白酶突变体(309)，野生型氨基酸序列包括第一环状区，第二环状区，第三环状区，第四环状区，第五环状区和第六环状区。其中修饰后的氨基酸序列在一个或多个环状区比野生型枯草蛋白酶(309)在特定的鉴定位点上有不同的氨基酸(即替换)，从而使枯草蛋白酶(309)突变体比野生型枯草蛋白酶相比对不溶性底物有降低的吸附作用和增强的水解作用。本发明还涉及编码这类枯草蛋白酶(309)突变体的DNA序列。本发明还涉及包含这类枯草蛋白酶(309)突变体的用于洗涤各类表面的组合物。

主权项

1.一种具有修饰的枯草蛋白酶309野生型氨基酸序列的枯草蛋白酶309突变体，其特征在于修饰的氨基酸序列包含在如下一个或多个位点的替换：193，194，195，196，197，199，200，201，202，203，204，205，206，207，208，209，210，211，212，213，或214。其中：a.当一个替换发生在193位点，用于替换的氨基酸为：Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；b.当一个替换发生在194位点，用于替换的氨基酸为：His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。c.当一个替换发生在195位点，用于替换的氨基酸为：Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。d.当一个替换发生在196位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。e.当一个替换发生在197位点，用于替换的氨基酸为：Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Ser、Asp或Glu。f.当一个替换发生在199位点，用于替换的氨基酸为：Met、Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。g.当一个替换发生在200位点，用于替换的氨基酸为：Asn、Ser或Ser。h.当一个替换发生在201位点，用于替换的氨基酸为：Asp或Glu。i.当一个替换发生在202位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。j.当一个替换发生在203位点，用于替换的氨基酸为：Ile、Met、Ala、His、Pro、Gln、Asn、Ser或Asp。k.当一个替换发生在204位点，用于替换的氨基酸为：Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。l.当一个替换发生在205位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。m.当一个替换发生在206位点，用于替换的氨基酸为：Asp或Glu。n.当一个替换发生在207位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、或Glu。o.当一个替换发生在208位点，用于替换的氨基酸为：Leu、Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Glu。p.当一个替换发生在209位点，用于替换的氨基酸为：His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu。q.当一个替换发生在201位点，用于替换的氨基酸为：Asp或Glu。r.当一个替换发生在211位点，用于替换的氨基酸为：Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Thr、Pro、Gly、Gln、Asn、Ser或Asp；s.当一个替换发生在212位点，用于替换的氨基酸为：Glu；t，当一个替换发生在213位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp、Ser或Glu；u.当一个替换发生在214位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Glu。这些突变使得枯草蛋白酶309突变体与野生型相比对于不溶性底物具有降低的吸附作用和增强的水解作用；其中优选地为：i.当一个替换发生在200位点，用于替换的氨基酸为Ser；ii.当一个替换发生在205位点，用于替换的氨基酸为Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；iii.当一个替换发生在208位点，用于替换的氨基酸为Leu、Ile、Val、Met、Cys、Ala、His、Pro、Gly、Gln、Asn、Asp或Gluiv.当一个替换发生在209位点，用于替换的氨基酸为：Pro、Gln、Asn、Ser、Asp或Glu；v.当一个替换发生在210位点，用于替换的氨基酸为：Asp或Glu。更优选的是：当一个替换发生在如下一个或位点：193，194，195，196，197，199，201，202，203，204，205，206，207，208，209，210，211，212，213或214，用于替换任何位点：193，194，195，196，197，199，201，202，204，205，206，208，209，210，211，212，213或214的氨基酸为Asp或Glu；当一个替换发生在203位点，用于替换的氨基酸为Asp；而当一个替换发生在位点207或212一个或两个时，用于替换207或212的氨基酸为Glu。