[发明专利]具有更低吸附性和更高水解能力的枯草溶菌素BPN’变异体

摘要

本发明涉及枯草溶菌素BPN′的变异体，它具有野生型BPN′氨基酸序列的修饰氨基酸序列，该野生型氨基酸序列包括第一环状区、第二环状区、第三环状区、第四环状区和和第五环状区；其中修饰的氨基酸序列在一个或多个环状区中的特定位点，包含与存在于野生型枯草溶菌素BPN′中的不同的氨基酸(即取代)，通过这些氨基酸的作用，BPN′变异体与野生型枯草溶菌素BPN′相比，对不可溶的底物具有更低的吸附性和更高的水解能力。本发明还涉及编码这样的枯草溶菌素BPN′变异体的基因。本发明还涉及用于清洁多种表面的包含该枯草溶菌素BPN′的组合物。

主权项

1.一种具有野生型氨基酸序列的经修饰的氨基酸序列的BPN’变异体，该野生型氨基酸序列包含第一环状区、第二环状区、第三环状区、第四环状区和第五环状区；其特征为修饰氨基酸序列在一个或多个环状区的一个或多个位点有取代；其中A.当取代发生在第一环状区时，该取代发生在位点59、60、61、62、63、65或66中的一个或多个位点；其中a.当取代发生在位点59时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酸或丝氨酸；b.当取代发生在位点60时，取代氨基酸是谷氨酸；c.当取代发生在位点61时，取代氨基酸是天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或丝氨酸；d.当取代发生在位点62时，取代氨基酸是天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或丝氨酸；e.当取代发生在位点63时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；f.当取代发生在位点65时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；并且g.当取代发生在位点66时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸；B.当取代发生在第二环状区时，该取代发生在位点95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106或107中的一个或多个位点；其中a.当取代发生在位点95时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸；b.当取代发生在位点96时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；c.当取代发生在位点97时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；d.当取代发生在位点98时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸；e.当取代发生在位点99时，取代氨基酸是谷氨酸；f.当取代发生在位点100时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；g.当取代发生在位点101时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；h.当取代发生在位点102时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；i.当取代发生在位点103时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酸或丝氨酸；j.当取代发生在位点104时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；k.当取代发生在位点105时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；l.当取代发生在位点106时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或缬氨酸；并且m.当取代发生在位点107时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；C.当取代发生在第三环状区时，该取代发生在位点126、127、128、129、130、131、132或133中的一个或多个位点；其中a.当取代发生在位点126时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；b.当取代发生在位点127时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；c.当取代发生在位点128时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸或丝氨酸；d.当取代发生在位点129时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸或丝氨酸；e.当取代发生在位点130时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；f.当取代发生在位点131时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸或丝氨酸；g.当取代发生在位点132时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；并且h.当取代发生在位点133时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸；D.当取代发生在第四环状区时，该取代发生在位点154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、166或167中的一个或多个位点；其中a.当取代发生在位点154时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；b.当取代发生在位点155时，取代氨基酸是天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或丝氨酸；c.当取代发生在位点156时，取代氨基酸是天门冬氨酸；d.当取代发生在位点157时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；e.当取代发生在位点158时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸；f.当取代发生在位点159时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；g.当取代发生在位点160时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；h.当取代发生在位点161时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；i.当取代发生在位点162时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；j.当取代发生在位点163时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；k.当取代发生在位点164时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸或丝氨酸；l.当取代发生在位点165时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸；m.当取代发生在位点166时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、脯氨酸或丝氨酸；并且n.当取代发生在位点167时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸或缬氨酸；E.当取代发生在第五环状区时，该取代发生在位点187、188、189、190或191中的一个或多个位点；其中a.当取代发生在位点187时，取代氨基酸是天门冬酰胺、天门冬氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸；b.当取代发生在位点188时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；c.当取代发生在位点189时，取代氨基酸是丙氨酸、天门冬酰胺、天门冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸或缬氨酸；d.当取代发生在位点190时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；并且e.当取代发生在位点191时，取代氨基酸是天门冬氨酸或谷氨酸；通过这些取代，与野生型枯草溶菌素BPN＇相比，BPN’变异体对不可溶底物具有更低的吸附性和更高的水解能力。