[发明专利]生产分离及纯化的摩拉克氏菌的主要外膜蛋白CD的方法

摘要

一种分离并纯化的非变性外膜蛋白CD通过一种分离方法得到，此蛋白本身是或相当于一种摩拉克氏菌株，特别是粘膜炎摩拉克氏菌的可分离部分。分离时把大批细菌裂解然后离心形成沉淀，并弃去包含在部分可溶蛋白的上清。此沉淀再选择性地抽提以去掉剩下的可溶性蛋白。除CD外的其它膜蛋白和其他杂质例如脂多糖和磷脂。剩下的包含CD的沉淀被分散和溶解，然后离心分级分离去掉余下的细胞残渣。该CD蛋白可用于诊断和免疫原性组合物，特别是在宿主体内施用提供抗疾病保护，该疾病是由于产生CD蛋白或另一种蛋白的细菌病原体引起的，其中该另一种蛋白可在宿主内诱导特异性与CD蛋白反应的抗体。

主权项

1.一种从产CD蛋白的细菌菌株生产分离及纯化的外膜蛋白CD的方法，包括如下步骤：(a)提供此细菌菌株的细胞团；(b)将此细胞团裂解产生细胞裂解液；(c)将此细胞裂解液分级分离，得到初级上清和初级沉淀，上清里含有基本上大部分可溶性细菌蛋白；(d)将所述初级上清与初级沉淀分开；(e)选择性抽提初级沉淀，基本上去掉所有可溶蛋白和除CD蛋白以外的膜蛋白，并产生次级上清和包含CD蛋白的经抽提的沉淀；(f)将此次级上清与经抽提的沉淀分开；(g)溶解此经抽提的沉淀得到溶解的抽提物；(h)把此溶解的抽提物分级分离，产生含CD蛋白的上清和应弃掉的沉淀；然后(i)将此含CD的上清与欲弃掉的沉淀分开。