[发明专利]具有降低吸附作用提高水解作用的蛋白酶K变异体

摘要

本发明涉及蛋白酶K的变异体,它们对野生型蛋白酶K的氨基酸序列进行了改良,野生型氨基酸序列包含第一环区、第二环区、第三环区、第四环区、第五环区和第六环区;其中改良的氨基酸序列是在一个或多个环区的特定位置上含有与野生型蛋白酶K不同的氨基酸(即替换),因此,与野生型蛋白酶K相比,蛋白酶K变异体降低了对不溶底物的吸附作用,并提高了对不溶底物的水解作用。本发明也涉及编码这些蛋白酶K变异体的DNA序列。本发明还涉及包含这些蛋白酶K变异体的用于清洁多种表面的组合物。

主权项

1.一种对野生型蛋白酶K的氨基酸序列进行改良的蛋白酶K变异体，野生型氨基酸序列中包含第一环区、第二环区、第三环区、第四环区、第五环区和第六环区，其中改良的氨基酸序列在一个或多个环区中的一个或多个位置上有替换；其中：A.当替换发生在第一环区时，替换发生在64、65、66、68、70或71位中的一个或多个上；其中a.当替换发生在64位时，替代氨基酸为Asp或Glu；b.当替换发生在65位时，替代氨基酸为Glu；c.当替换发生在66位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；d.当替换发生在68位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；e.当替换发生在70位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；f.当替换发生在71位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；B.当替换发生在第二环区时，替代发生在95、96、97、98、100、102、103、104、106或107位中一个或多个上；其中a.当替换发生在95位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Met、Pro、Ser或Thr；b.当替换发生在96位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val；c.当替换发生在97位时，替代氨基酸为Glu；d.当替换发生在98位时，替代氨基酸为Glu；e.当替换发生在100位时，替代氨基酸为Asn、Gln、Pro或Ser；f.当替换发生在102位时，替代氨基酸为Asn、Gln、Glu、Pro或Ser；g.当替换发生在103位时，替代氨基酸为Asn或Ser；h.当替换发生在104位时，替代氨基酸为Asp、His、Ile、Leu、Met、Pro或Val；i.当替换发生在106位时，替代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；和j.当替换发生在107位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val；C.当替换发生在第三环区时，替代发生在133、134、136、137、138、139或140位中一个或多个上；其中a.当替换发生在133位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro、Ser、Thr或Val；b.当替换发生在134位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；c.当替换发生在136位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；d.当替换发生在137位时，替代氨基酸为Asp、His、Ile、Leu、Met或Pro；e.当替换发生在138位时，替代氨基酸为Asp或Glu；f.当替换发生在139位时，替代氨基酸为Asp或Glu；和g.当替换发生在140位时，替代氨基酸为Asp或Glu；D.当替换发生在第四环区时，替换发生在161、162、163、164、165、166、167、168、169或170位中一个或多个上；其中a.当替换发生在161位时，替代氨基酸为Gln；b.当替换发生在162位时，替代氨基酸为Asp、Gln、Glu或Ser；c.当替换发生在163位时，替代氨基酸为Asp、Gln、Glu或Ser；d.当替换发生在164位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Pro、Ser或Thr；e.当替换发生在165位时，替代氨基酸为Glu；f.当替换发生在166位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Pro、Ser或Thr；g.当替换发生在167位时，替代氨基酸为Asp或Glu；h.当替换发生在168位时，替代氨基酸为Asp、Gln、Glu或Ser；i.当替换发生在169位时，替代氨基酸为Asp、His、Ile、Leu、Met或Pro；和j.当替换发生在170位时，替代氨基酸为Asp或Glu；E.当替换发生在第五环区时，替换发生在190、192、193或194位中的一个或多个上，其中a.当替换发生在190位时，替代氨基酸为Asp或Glu；b.当替换发生在192位时，替代氨基酸为Asn、Cys、Gln、His、Ile、Met、Pro、Thr、Tyr或Val；c.当替换发生在193位时，替代氨基酸为Asp或Glu；和d.当替换发生在194位时，替代氨基酸为Asp、Gln、Glu或Ser；和F.当替换发生在第六环区时，替换发生在203、204、205、206、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222或223位中的一个或多个上；其中a.当替换发生在203位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；b.当替换发生在204位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly或Ser；c.当替换发生在205位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；d.当替换发生在206位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、Pro或Ser；e.当替换发生在208位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val；f.当替换发生在209位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val；g.当替换发生在210位时，替代氨基酸为Asp或Glu；h.当替换发生在211位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；i.当替换发生在212位时，替代氨基酸为Asp或Glu；j.当替换发生在213位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val；k.当替换发生在214位时，替代氨基酸为Asn、Gln、Pro或Ser；l.当替换发生在215位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；m.当替换发生在216位时，替代氨基酸为Asp或Glu；n.当替换发生在217位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、Pro或Ser；o.当替换发生在218位时，替代氨基酸为Asp或Glu；p.当替换发生在219位时，替代氨基酸为Asp或Glu；q.当替换发生在220位时，替代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val；r.当替换发生在221位时，替代氨基酸为Asp或Glu；s.当替换发生在222位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；t.当替换发生在223位时，替代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；因此与野生型蛋白酶K相比，蛋白酶K变异体降低了对不溶底物的吸附作用而提高了对不溶底物的水解作用。