[发明专利]具有降低吸附增强水解作用的枯草杆菌蛋白酶DY变异体

摘要

本发明涉及枯草杆菌蛋白酶DY变异体,其具有对野生型枯草杆菌蛋白酶DY氨基酸序列进行过改良的氨基酸序列,该野生型氨基酸序列包括第一环区、第二环区、第三环区、第四环区、第五环区和第六环区;其中改良的氨基酸序列是在一个或多个环区的特定识别位置上包括与野生型枯草杆菌蛋白酶DY不同的氨基酸(即取代),由此,枯草杆菌蛋白酶DY变异体与野生型枯草杆菌蛋白酶DY相比对不溶性底物具有降低的吸附作用和增强的水解作用。本发明还涉及编码这种枯草杆菌蛋白酶DY变异体的DNA序列。本发明也涉及包含该枯草杆菌蛋白酶DY变异体的用于清洗各种表面的组合物。

主权项

1.一种对野生型枯草杆菌蛋白酶的氨基酸序列进行了改良的枯草杆菌蛋白酶DY变异体，该野生型氨基酸序列包括第一环区、第二环区、第三环区、第四环区、第五环区和第六环区；其中改良的氨基酸序列是在一个或多个环区中一个或多个位置上有取代；其中：A、当取代发生在第一环区时，在58、59、60、61、62、64或65位的一个或多个位置上发生取代，其中c.取代发生在第60位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Pro或Ser；f.取代发生在第64位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；以及g.取代发生在第65位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、Pro或Ser；B、当取代发生在第二环区时，在94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105或106位的一个或多个位置上发生取代，其中a.取代发生在第94位时，取代氨基酸为Ala、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro或Ser；b.取代发生在第95位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Asp、Cys、Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Valc.取代发生在第96位时，取代氨基酸为Gln或Ser；f.取代发生在第99位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Pro或Ser；h.取代发生在第101位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；i.取代发生在第102位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；j.取代发生在第103位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro或Ser；l.取代发生在第105位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、His、Pro、Ser或Thr；和m.取代发生在第106位时，取代氨基酸为Ala、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro、Ser或Val；C、当取代发生在第三环区时，在125、126、127、128、129、130、131或132位的一个或多个位置上发生取代，其中a.取代发生在第125位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro、Ser、Thr或Val；b.取代发生在第126位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Serd.取代发生在第128位时，取代氨基酸为Asn、Gln或Ser；g.取代发生在第131位时，取代氨基酸为Asp或Glu；和h.取代发生在第132位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；D、当取代发生在第四环区时，在153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165或166位的一个或多个位置上发生取代，其中b.取代发生在第154位时，取代氨基酸为Gln或Serd.取代发生在第156位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；和n.取代发生在第166位时，取代氨基酸为Ala、Gly、His、Ile、Leu、Met或Pro；E、当取代发生在第五环区时，在186、187、188、189或190位的一个或多个位置上发生取代，其中c.取代发生在第188位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Tyr或ValF、当取代发生在第六环区时，在199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218或219位的一个或多个位置上发生取代，其中a.取代发生在第199位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、His、Pro、Ser或Thr；b.取代发生在第200位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly或Ser；c.取代发生在第201位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Pro或Ser；d.取代发生在第202位时，取代氨基酸为Ala、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro或Ser；f.取代发生在第204位时，取代氨基酸为Ala、Cys、Gln、Gly、His、Met、Pro或Ser；g.取代发生在第205位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro或Ser；h.取代发生在第206位时，取代氨基酸为Asp或Glu；i.取代发生在第207位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；j.取代发生在第208位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Met、Pro或Ser；k.取代发生在第209位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly或Ser；、m.取代发生在第211位时，取代氨基酸为Gln或Ser；n.取代发生在第212位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；o.取代发生在第213位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Met或Pro；p.取代发生在第214位时，取代氨基酸为Asn、Gln、Gly、Pro或Ser；r.取代发生在第216位时，取代氨基酸为Ala、Asn、Cvs、Gln、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val；和u.取代发生在第219位时，取代氨基酸为Asn、Asp、Gln、Glu、Gly、Pro或Ser；由此与野生型枯草杆菌蛋白酶DY相比，本枯草杆菌蛋白酶DY变异体对不溶性底物具有降低的吸附作用和增强的水解作用。