[发明专利]利用革兰氏阳性菌表达重组蛋白质

摘要

一种用来在革兰氏阳性菌中克隆和表达基因的新系统。此表达系统是基于如下发现：许多革兰氏阳性菌通过顺式作用N一末端信号序列和C-末端锚定区将蛋白分选至其细胞表面。具体而言，链球菌M6蛋白，一种熟知的表面分子，其细胞分选信号被用于构建革兰氏阳性表达系统，称之为SPEX(链球菌蛋白表达)。通过将目的基因克隆入合适的SPEX盒，然后将此盒稳定导入细菌宿主如人共生格氏链球菌而实现表达。根据所用的SPEX载体，重组蛋白在由特定的内切蛋白酶切割释放之前可被锚定于细胞壁上或在细菌生长过程中被分泌入培养基中。使用缺失胞外蛋白酶的宿主细菌会保护分泌的蛋白不被蛋白酶降解。此系统中一些表达载体还生产被特异性标记的重组蛋白，使所得产物可一步纯化。

主权项

1.一种在革兰氏阳性细菌中表达所需蛋白质的方法，包括：选择一种异源细菌宿主，此宿主是革兰氏阳性菌，其胞外蛋白酶的产生缺陷，并能通过C-末端分选信号锚定表面蛋白；将质粒载体导入宿主，此载体包含编码革兰氏阳性细胞壁表面蛋白氨基和羧基端分选序列和所需蛋白质的DNA片段，以及在所选宿主中起作用的转录和翻译控制序列；表达融合蛋白，此融合蛋白含所需蛋白、N-末端信号序列和C-末端分选序列，其中被表达的融合蛋白锚定于宿主细胞表面；使用蛋白酶从宿主细胞表面切割下被锚定的蛋白；和回收并纯化切割下的蛋白。