[发明专利]改良无限增殖化人类皮肤细胞系和用于其生产的新型无血清培育基

摘要

本发明涉及改良的连续(无限增殖化)细胞系，特别是从正常人类皮肤组织衍生的角化细胞和黑素细胞。本发明也涉及用于分离、生产和保持所述改良的无限增殖化角化细胞系和黑素细胞系的新型无血清培养基。本发明也涉及在无血清的条件下、不加任何饲养细胞生产原代角化细胞和黑素细胞的方法。

主权项

1.无限增殖化人皮肤细胞以获得无限增殖化角化细胞和黑素细胞的改良方法，包括以下步骤：(i)获取人皮肤组织样本；(ii)制备用于体外培养的所述皮肤样本；(iii)从所述制备的皮肤样本中获取角化细胞和/或黑素细胞，将这些角化细胞和/或黑素细胞接种到备有外被层的培养皿上的无血清生长培养基中，该外被层包含纤维粘连蛋白、I型胶原蛋白和BSA，该外被层促进细胞附着和生长；(iv)必要时更换培养基，以使培养细胞的铺满生长达到最佳化，同时在培养皿上连续保持该外被层；(v)将角化细胞或黑素细胞转移到同样预铺外被层的培养皿上的无血清选择培养基；(vi)用逆转录病毒构建体感染角化细胞或黑素细胞；(vii)将产生的无限增殖化角化细胞或黑素细胞转移到同样预铺外被层的培养皿上的无血清增殖培养基上，这种培养基适用于无限增殖化角化细胞或黑素细胞的增殖；(viii)将产生的增殖角化细胞转移到同样预铺外被层的培养皿上的含高钙的无血清分化培养基中。