[发明专利]生物组织原位三维测量细胞化学成份含量的方法

摘要

本发明属于生物组织的测定或检测方法技术领域，具体涉及一种测量生物细胞化学成份含量的方法，其步骤包括测量目标细胞体积及其体积大小分布；测量目标细胞或细胞核平均光密度及其大小分布；分析计算目标细胞或细胞核，体积积分光密度及其大小分布；三维目标细胞群体间某化学成分含量的比较。采用本测量分析技术，可获得大量的统计量和完整的细胞信息，提高测量的准确性和速度。

主权项

1.一种生物组织原位三维测量细胞化学成分含量的方法，其特征在于它包含以下步骤：(1)测量组织切片内三维目标细胞群体的某化学成份含量及其含量分布频率：①切取两张不同厚度的各向同性切片或垂直切片或任意切片，薄切片3-4μm厚，作化学成份特异染色或不染色，厚切片约10μm，作能清晰反映目标轮廓的染色；②测量组织切片内目标细胞体积及其体积大小分布：A.抽样：采用较厚的切片，调节显微镜聚焦微调，使组织切片内的细胞图像轮廓发生由小到大，又由大到小或细胞图像轮廓由恒定大变小，以获得待测细胞的最大空间直径的图像，并将该细胞的最大轮廓图像作为抽样和测量对象，每抽样一个细胞后，改变摄像机成像平面与显微镜视场平面在平行方向上相互间的角度；或利用图像仪具有的自动旋核距测量尺角度功能自动旋转核距尺的方向来取单个细胞的最大轮廓图像，将所抽样的单个细胞最大轮廓图像集中贮存待测；B.测量：采用体视学核距测量法计算公式，人为移动图像仪的“十”字型核距尺来确定或由图像仪自动确定单个细胞最大轮廓二值图像的核心和经过核心的四个核距，并由图像仪自动计算该细胞的体积，所抽样细胞的体积及其大小分布即为该类细胞体积的概率分布；③测量目标细胞切片的平均光密度及其大小分布：A.测量系统设置：使用较小数值孔径的显微镜物镜，按满足测量光密度性能指标的显微图像分析仪操作要求调整该系统，根据所测细胞化学成份的光谱特性选用适当波长的滤光片或特定波长的照明光；B.对薄切片均匀随机抽取显微镜视场摄像，按显微图像分析仪操作要求，测量目标细胞或细胞核轮廓内的平均光密度及其群体的大小分布，即为目标细胞或细胞核内某化学成份的浓度的概率分布；④分析计算组织切片内目标细胞体积积分光密度及其概率分布：将上述获得的该类细胞体积的概率分布和平均光密度的概率分布，进行概率相乘，获得目标细胞体积积分光密度均值及其分布，即反映该细胞群体的某化学成份的含量及其不同含量个体的分布。(2)三维目标细胞群体间某化学成份含量的比较：在获得满足上述条件的两组或两组以上的三维目标细胞群体化学成份含量的体积积分密度值以后，以参照细胞群体组的某化学成份的体积积分光密度均值或中值或峰值作分母，以目标细胞群体的体积积分光密度概率分布为分，相除获得三维目标细胞群体与参照细胞群体某化学成份真实含量值差异的比率的分布值，通过确定参照细胞群体某化学成份真实含量的绝对值，就可获得目标群体某化学成份真实含量绝对值的分布状态。