[发明专利]生产核苷－5’－磷酸酯的方法

摘要

通过用生化方法将核苷磷酸化，便宜并高效地生产核苷-5’-磷酸酯的方法。通过使酸性磷酸酶、尤其是对核苷具有较高亲和性和/或温度稳定性提高的酸性磷酸酶以及导入具有所述酸性磷酸酶活性的蛋白质编码基因的微生物，在pH3.0-5.5条件下作用于核苷和磷酸基团供体(选自聚磷酸或其盐、苯膦酸或其盐和氨甲酰磷酸或其盐)产生并收集核苷-5’-磷酸酯，生产核苷-5’-磷酸酯。

主权项

1.生产核苷-5’-磷酸酯的方法，包括下列作用于转磷酸反应的步骤：将(1)选自肌苷、鸟苷、腺苷、黄苷、嘌呤核糖核苷、6-甲氧基嘌呤核糖核苷、2，6-二氨基嘌呤核糖核苷、6-氟嘌呤核糖核苷、6-硫代嘌呤核糖核苷、2-氨基-6-硫代嘌呤核糖核苷、巯基鸟苷、尿苷、胞苷、5-氨基尿苷、5-羟基尿苷、5-溴尿苷和6-氮杂尿苷的核苷，和(2)选自多磷酸或其盐、苯磷酸或其盐、氨甲酰磷酸或其盐和乙酰磷酸或其盐的磷酸基团供体，在酸性磷酸酶存在下，在pH3.0-5.5的溶液中进行反应，产生核苷-5’-磷酸酯，并分离核苷-5’-磷酸酯，其中酸性磷酸酶包含选自SEQIDNo：4、8、24、26、28的氨基酸序列，并且所述酸性磷酸酶具有与选自SEQIDNo：4、8、24、26、28的氨基酸序列相比，核苷Km值降低和/或温度稳定性提高的突变，其中核苷Km值是通过在30℃，pH4.0，在100μmol/ml的焦磷酸钠的存在下测量酸性磷酸酶的转磷酸活性确定的。