[发明专利]新的鉴定刺激STF－1在胰岛细胞内表达的化合物的方法

摘要

本发明提供了两种实施方式。其一是检测能够诱导STF-1转录的化合物的方法。分离出表达STF-1/lacZ融合基因的胰岛细胞，通过将待测化合物加入表达STF-1/lacZ的细胞来测定各种化合物的作用。然后利用比色法定量测定对照细胞和经处理细胞内的lacZ活性。利用此方法可以筛选大量化合物并可以方便地鉴定出STF-1诱导性化合物。其二是在体内用STF-1启动子标记产生胰岛素的胰岛细胞的方法。其中，绿荧光蛋白(GFP)被用作指示物。用转基因方法将STF-1-绿荧光蛋白引入猪体内就能够高效迅速地从胰腺中回收产生胰岛素的细胞。

主权项

1.一种测定被测化合物刺激胰岛细胞诱导STF-1转录的能力的方法，它包括以下步骤：提供包含操作性相连的STF-1增强子，STF-1启动子和报道基因的载体，所述STF-1增强子是SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.2或它们的具有STF增强子活性的片段，所述STF-1启动子包含选自S1，S2或S3的转录起始位点，所述S1，S2或S3分别位于翻译起始位置上游第91、107和120/125位核苷酸，所述报道基因的表达使胰岛宿主细胞具有可测信号；在体外将所述载体转移到所述宿主细胞内；在被测化合物存在下培养所述的宿主细胞；分析所述被测化合物刺激所述宿主细胞产生所述可检测信号的能力，其中有所述信号的存在表示所述被测化合物刺激胰岛细胞诱导了STF-1的转录，而没有所述信号则表示所述的被测化合物没有刺激胰岛细胞诱导STF-1的转录。