[发明专利]固定化模板指导的寡核苷酸合成方法

摘要

一种固定化模板指导的寡核苷酸合成方法，该法是提供一条寡核苷酸，将它固定到固相载体上作为模板，然后将单核苷酸或数段与模板配对的短片段寡核苷酸通入柱中与模板通过碱基配对，再通入缩合剂使单核苷酸或短片段寡核苷酸连接成长片段寡核苷酸，通入热水使产物与模板解离，得到所要产物。由于模板可以反复使用，因此该方法合成寡核苷酸具有成本低，条件要求不高的优点。适宜于寡核苷酸的大规模生产。

主权项

1.一种合成寡核苷酸的方法，是利用碱基配对，在缩合剂的作用下模板指导的化学连接，其特征在于该法是以一条寡核苷酸为模板进行固定化，可以反复使用来指导寡核苷酸合成的固定化模板指导的寡核苷酸合成方法，该方法包括下列步骤：1〕，提供一条寡核苷酸作为模板，所说的寡核苷酸为DNA、RNA、PNA及其修饰衍生物中的一种；2〕，将该寡核苷酸模板的一端通过共价连接固定到固相载体上，所说的固相载体为微孔玻璃颗粒、交联琼脂糖、聚苯乙烯或聚丙烯酰胺中的一种；3〕，将单核苷酸或数段与模板配对的短片段寡核苷酸通入柱中与模板通过碱基配对；4〕，通入缩合剂使单核苷酸或短片段寡核苷酸连接成长片段寡核苷酸产物，所说的缩合剂为EDC或BrCN；反应体系为：0.4MBrCN、0.2MES-三乙胺pH7.5和20mMMgCl2，反应温度为0℃，或反应体系为：0.1MEDC、0.2MMES-三乙胺pH6.0、20mMMgCl2、0.1M咪唑、10mM5’dNMP，反应温度为0℃；5〕，通入热水使产物与模板解离，得到所需产物，而模板仍然留在柱上可以反复使用。