[发明专利]用于治疗急性血栓疾病的地龙溶栓酶针剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于治疗急性血栓疾病的地龙溶栓酶针剂的制备方法，其特征在于将地龙粉经溶解、沉淀、离子交换、疏水层析、分子筛层析和亲和层析，得到三种具有活性的地龙溶栓酶，制成针剂或冻干制品，该产品纯度高，治疗效果好，毒副作用小。

主权项

1、用于治疗急性血栓性疾病的地龙溶栓酶针剂制备方法，其特征在于 它按下步骤进行： a)将地龙粉用PH＝4-10的0.02M缓冲液进行搅拌溶解，其重量浓度为5- 20％，经离心分离取上清，用硫酸铵进行初级沉淀，其最终饱和度为20-30％，离 心分离取上清，再用硫酸铵进行二级沉淀，其最终饱和度为40-70％，离心取沉 淀，用水溶解沉淀，在PH＝4-10的缓冲液中充分透析除去硫酸铵，得到粗级混合 地龙溶栓酶溶液； b)再将(a)项粗级混合地龙溶栓酶溶液，用阴离子交换剂交换，进 样前，用PH＝4-10的0.02M缓冲液平衡交换剂，进样吸附后，用前述缓冲液淋洗 后，再用含氯化钠的前述缓冲液进行梯度洗脱，收集三种具有溶栓活性的地龙 溶栓酶峰液，得到用于提取分子量分别为1.0-3.0万、2.5-4.0万、3.5-5.0万三种 地龙溶栓酶粗级产品，依次命名为F_I、F_II、F_III； c)将b)项的F_I、F_II、F_III分别进行超滤浓缩，浓缩比为5∶1-20∶1的体 积； d)再将浓缩后的F_I、F_II、F_III分别用疏水层析剂进行疏水层析，进样 前，用含硫酸铵的PH＝4的0.02M缓冲液平衡层析剂，进样后，用前述平衡缓冲 液冲洗后，再用含硫酸铵的PH＝4-10的缓冲液进行梯度洗脱，分别收集具有溶 栓活性的地龙溶栓酶峰液，得到F_I、F_II、F_III的纯化产品； e)再将(d)项三种纯化产品分别进行超滤、浓缩，浓缩比30∶1-50∶1， 用分子筛过滤层析，进样前，用PH＝6-8的0.2M缓冲液平衡层析剂，进样后，用上 述缓冲液淋洗，分别收集具有溶栓活性的地龙溶栓酶峰液，得到进一步纯化的 F_I、F_II、E_III产品； f)最后将(e)项中三种地龙溶栓酶液分别用亲和层析剂进行亲和层 析，进样前用PH＝6-9的0.02M缓冲液平衡亲和层析剂，进样吸附后，用上述缓 冲液冲洗后，改用PH＝4-10的0.1M-1M的精氨酸溶液洗脱，分别收集具有溶栓 活性的组份，分别透析，除菌过滤，最终制成分子量为1.5-3.0万、3.5-4.0万、3.5- 5.0万的三种液体。