[发明专利]以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶及制法

摘要

本发明涉及一种以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶及制法。本发明用悬浮聚合法制出多元共聚多孔微珠，经过表面改性和活化，将青霉素酰化酶结合上去而制成。本发明制备的固定化青霉素酰化酶颗粒直径为80-400μm，湿密度为1.02-1.10g/cm³；强度高，不易染菌，适合于反应器操作；其活性比用琼脂糖6B微珠制备的固定化酶活性高5-10倍，比用Eupergit C制备的固定化酶活性高2-3倍，综合性能优于已有的产品；成本低，制备方法简单，适于工业生产。

主权项

1.一种以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶，该固定化青霉素酰化酶颗粒直径为80-400μm，湿密度为1.02-1.10g/cm3；它依下列制备方法获得：(1)微珠制备：将单体A、单体B、单体C、单体D充分混合；每100g上述混合单体，加入引发剂0.8-1.3g，致孔剂6-30ml和200#汽油0-20ml；在单体总体积3-4倍的含有1-4％wt的明胶及1％wt Mg(OH)2的悬浮体系中进行聚合反应，40℃开始缓慢升温，升温速率为0.45-0.65℃/min，65-70℃聚合5小时，70℃以上同化6-10小时，过筛，用大量的水洗涤，然后用丙酮浸泡，洗去致孔剂，得到多孔型微珠；(2)表面改性：将上述微珠风干，加入过量的含3-5％wt NaOH的甲醇溶液，18-25℃反应24-48小时后，抽滤，用丙酮洗涤三次，即制得固定化酶用的载体；(3)载体活化：根据活化试剂的种类采用不同的活化工艺条件；(4)挂酶：按每0.2-0.4g载体，以载体湿重计算，加入800单位的青霉素酰化酶酶液的比例，于19-22℃反应36小时后再加入等量的青霉素酰化酶，继续反应12-24小时后停止；产物依次以24％wt的(NH4)2SO4或0.5M的NaCl溶液和pH8.0的磷酸缓冲液洗涤，得到以多元共聚多孔微珠为载体的固定化青霉素酰化酶。