[发明专利]多肽药物的高效基因工程生产方法

摘要

本发明用真核或原核细胞表达低分子量多肽活性物质。在核酸水平上，利用DNA限制性内切酶中的同尾酶具有识别水解不同DNA序列，但产生相同的粘性末端，且当二者的粘性末端连接后，该位点不再能被同尾酶识别的特性，将编码目标肽段的DNA分子串联重复，构成多聚体，并根据目标肽段的氨基酸组成及序列特点，在各DNA单体分子间插入适当的核苷酸序列，这些特定的核苷酸序列在翻译为氨基酸后，成为使串联重复目标肽段的多聚体断裂为单体的加工位点。

主权项

1.一种多肽的基因工程制备方法，其特征在于在DNA水平上将目标肽段DNA序列串联为多聚体，其中目标肽段的长度为5-44个氨基酸，串联单体的数量为2-32，在表达目标肽的核酸的5’端及3’端分别加上一段间隔序列，再分别加上同尾酶的识别序列，通过用同尾酶水解、连接反应步骤的重复，构建目标肽段基因的串联重复多聚体，并用原核细胞表达目标肽段的串联重复多聚体，利用所述间隔序列所编码的氨基酸序列作为目标肽段多聚体的断裂、切割加工位点，用化学或者酶学方法将表达的目标肽段多聚体断裂，切割加工为目标肽段单体分子，其中所述的间隔核苷酸序列的选择应满足下述条件，即其编码的氨基酸序列经断裂、切割加工后使所得的目标肽单体的序列与原有序列相比没有变化。