[发明专利]一种快速高效分离和纯化重组腺病毒相关病毒的方法和用途无效
| 申请号： | 99123723.4 | 申请日： | 1999-11-17 |
| 公开（公告）号： | CN1139656C | 公开（公告）日： | 2004-02-25 |
| 发明（设计）人： | 吴小兵;董小岩;侯云德 | 申请（专利权）人： | 本元正阳基因技术股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/02 | 分类号： | C12N7/02;C12N15/861;A61K48/00;A61P43/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 100176北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明利用AAV病毒颗粒具有抗氯仿处理的特点，提出了一种用PEG/NaCl系统和氯仿快速而高效分离和纯化rAAV病毒的方法。该方法适合于大规模分离和纯化rAAV病毒和生产工艺化。尤其适用于以HSV病毒为辅助病毒产生的rAAV的纯化，也可用于无辅助病毒包装系统或无细胞体外包装系统生产的rAAV的纯化。经本发明纯化的rAAV病毒可用于基因转移和基因治疗。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 快速 高效 分离 纯化 重组 病毒 相关 方法 用途 | ||
【主权项】：
1.一种rAAV病毒分离、纯化的方法，其特征是，以含有rAAV病毒的细胞及 培养液作为粗制裂解液，经过以下步骤进行分离、纯化： 1)在粗制裂解液中加入氯仿，灭活HSV辅助病毒、裂解细胞、使大量细胞 蛋白变性沉淀，得到细胞裂解液； 2)在细胞裂解液中加固体氯化钠至终浓度1.0～1.2mol/L，搅拌溶解，离心、 留上清； 3)用PEG/NaCl沉淀rAAV，在步骤2)所述的含氯化钠的上清中加入固体 聚乙二醇，搅拌溶解，静置、离心、弃上清，留沉淀； 4)用DNaseI和RNase处理细胞裂解液以降解核酸，溶解步骤3)中所述的 沉淀，加DnaseI和RNase溶解rAAV病毒颗粒以外的残余核酸； 5)用氯仿抽提去除杂蛋白和残余的PEG，加入氯仿抽提，离心，吸取上层 水相； 6)透析除盐； 7)用密度梯度离心法或亲和层析法进一步纯化rAAV。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于本元正阳基因技术股份有限公司，未经本元正阳基因技术股份有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/99123723.4/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种人卵巢癌永生化细胞株及其建立方法
- 下一篇：用于稳定乳酸菌的肠包衣微颗粒
