[发明专利]在杀真菌剂筛选中孢子附着测定的应用

说明书

真菌是植物和人类许多重要疾病的病原体，也引起材料如木材、油漆和塑料的生物性腐蚀。需要不断发现新的比已存在的产品更有效的抗真菌化合物，以及具有对环境更有利和在毒性方面更有利的性质。

为了增加成功发现具有有利性质的新抗菌化合物的机率，需要筛选大量尽可能有效的化合物。经常地，可利用的供试化合物数量少，迫使使用一些“离体”筛选形式，即在微量滴定板或其他小容器中评价杀真菌毒性，而不是在植物上测定每一种化合物控制真菌病害的能力。

许多不同的技术可用于“离体”测定杀真菌毒性。常用的方法包括测定供试化合物在接种了真菌的琼脂板上产生的生长抑制圈，测定在补加有供试化合物的营养培养基上的真菌菌落的直径，在含有补加了供试化合物的营养培养基的微量滴定板或其他容器上用肉眼或分光光度计评价菌丝体的生长。

萌发试验即评价化合物抑制孢子萌发能力的试验，也已经广泛地用于体外测定杀真菌毒性。这种方法的优越之处是对于许多真菌而言孢子萌发非常快速地发生，允许杀真菌毒性的效果在几个小时之内测定，而不象其他经典方法得需一天或多天。更大的优越性是对于不可能在实验室培养基上培养的“专性”真菌病原菌如锈菌和白粉病菌可以进行孢子萌发测定。像这样的专性病原菌的孢子可从感染的植物上采集，在离体的适当条件下诱导萌发{例如参见，M.A.de Waard，Meded.Fac.Landbouwwetensch.36，113-119(1971)，和J.Gorska-Poczopko，Bulletin de l’Academie Polonaise des Sciences，20，681-684(1972)}。萌发试验对于评价抗真菌化合物的作用机制也非常有用。对于许多化合物，孢子萌发是在真菌生长中对抑制最敏感的阶段，而其他具杀真菌毒性的化合物可能对萌发显示出很少或无抑制，但对随后的菌丝体生长存在极强的抑制。因此，萌发测定与其他测定杀真菌毒性的方法，如测定菌丝体生长的抑制或控制植物、动物或材料上的真菌菌落的方法，可为洞察化合物的杀真菌毒性机制提供有价值的信息。

孢子萌发试验的主要缺点是为评价萌发，需要显微镜检查孢子，这是一种单调乏味的和强体力劳动的工序，该工序本身导致不能筛选大量的化合物。本发明通过排除对孢子的显微观察的需要而克服了这个困难。

本发明的基础是发现了：

1、正在萌发的真菌孢子对基质的牢固附着(萌发-伴生附着)是真菌的一般特性，这可以区别于在其他发育阶段的真菌附着。

2、萌发-伴生附着可以被抗真菌化合物抑制。

3、抑制萌发-伴生附着的能力与抑制孢子萌发的能力具有良好的相关性，因此，是一种有用的抑制萌发能力的测定指标，该能力可用于杀真菌剂的筛选。

因此，萌发-伴生的孢子附着的测定可以替代基于抑制萌发能力的化合物筛选时的显微镜检查。