[发明专利]一种用重组基因转染的异体皮肤

说明书

本发明涉及一种用重组基因转染的异体皮肤，具体地说，本发明涉及一种用CTLA4Ig重组基因转染的异体皮组织，用于覆盖烧伤等创面，从而促进创面愈合，减少疤痕形成。

对烧伤创面异体(种)皮肤移植的研究是现代烧伤治疗的迫切需要：烧伤是一类发生率及致残率均较高的特殊类型创伤，其根本问题就是创面问题，如果烧伤创面得不到及时有效的覆盖、封闭，必将引起患者机体内环境的紊乱、感染及多脏器功能障碍的发生；此外，还将出现创面的非生理性愈合，使疤痕形成增加，残疾程度加剧。因此，对烧伤创面的研究一直是烧伤界研究的热点及难点。

异体皮及异种猪皮早已应用于烧伤创面治疗中，但由于移植后的免疫排斥反应，使它们的应用及疗效受到了极大地限制。深度烧伤创面需经皮肤移植才能愈合，而大面积、特大面积烧伤患者自体皮源严重不足，需经非自体(异体和异种)皮覆盖创面，但非自体皮将在短时间内(2-4周)被排斥，即使是试图通过近年发展起来的微粒皮技术封闭创面，也需应用异体(种)皮覆盖于微粒皮上，以为自体微粒皮提供合适的生长增生条件，但我们在临床上发现：在微粒皮还没有完全生长覆盖创面前，异体(种)皮就由于免疫排斥等而坏死脱落，使微粒皮失去继续生长扩展的环境，从而使手术达不到理想的效果。另外，切取自体皮同样也是一种创伤，很多患者不愿切取自体皮，而希望有其它皮肤代替。所以如何延长烧伤创面异体(种)移植皮肤成活甚至永久成活的研究是现代烧伤治疗的迫切需要。

影响器官移植成功的关键是免疫排斥反应，迄今，防治移植排斥反应的主要对策是通过过各种途径抑制宿主的免疫功能。也正是由于免疫抑制性药物如环疱霉素、FK506、OKT3等的问世，包括皮肤移植在内的器官移植取得了长足的进展。但是这些药物都有一个共同的特点，其抑制机体免疫功能的作用是非特异的、全面持久的，从而易引发感染、产生肿瘤等严重后果。所以近年来医学界提出了特异性免疫耐受理论：即机体仅对移植抗原产生耐受，而保留机体的其它免疫功能。目前诱导宿主特异性免疫耐受主要有以下四种方法：(1)胸腺中注射供体细胞或MHC抗原；(2)封闭CD4和CD8T淋巴细胞；(3)改造供体的MHC抗原；(4)阻断T细胞辅助刺激信号系统。其中，阻断T细胞辅助刺激信号系统被认为是最有前途的方法。从免疫耐受理论出发，并结合临床实际，近来又有人提出了局部免疫耐受(1ocal immunetolerance)理论，即通过各种方法在移植局部环境中抑制宿主的免疫功能，引发局部免疫耐受。这样，既达到延长移植物存活时间，又使对宿主自身免疫功能的影响降到最低程度。这对烧伤治疗尤为关键，因烧伤病人，特别是严重烧伤患者，免疫功能紊乱，免疫力低下，而致极易并发感染。如此时再抑制患者的免疫功能，则更易引发致命性感染等严重后果。所以我们综合阻断T细胞辅助信号和局部免疫耐受两个学术观点，并结合烧伤创面治疗实际特点，通过在烧伤创面诱导移植皮肤局部特异性免疫耐受，而达到延长移植异种皮肤成活甚至永久成活的目的。

皮肤移植的免疫排斥反应是典型的细胞性排斥反应，活化的T细胞在皮肤移植排斥反应中起着决定性作用。而近年的研究表明，T细胞必须在TCR/MHC识别及辅助刺激信号共同作用下才能完全活化。阻断辅助刺激信号，将会引起T细胞的无反应，或细胞凋亡(apoptosis)。迄今，已发现多种辅助刺激信号系统，如B7/CD28-CTLA4系统，CD40/CD40L系统，CD95(Fas)/FasL系统等。但迄今的研究认为，在所有的辅助刺激信号系统中，B7/CD28-CTLA4系统的作用最大、最肯定。可溶性CTLA4能竞争性阻断抗原提呈细胞的B7分子与T细胞上的CD28结合，从而阻断T细胞的完全活化。研究表明，外源性CTLA4可明显抑制各种抗原刺激的T细胞的活化。但它并不影响T细胞的细胞毒性等功能，此时的T细胞同样对入侵的病毒、细菌等具有免疫能力；并且CTLA4只有在应用时才阻断T细胞的活化，没有持续及累加效应。这些是目前各种正在应用的免疫抑制剂无法比拟的。研究表明，CTLA4对以T细胞过度活化为主要原因的自身免疫性疾病等有明显的治疗作用；它还能明显延长心、肾、胰岛等移植器官的成活。在现有技术中，没有它在烧伤创面皮肤移植方面的应用。同时由于CTLA4的制备、提纯困难，全身甚至局部应用费用昂贵，且研究发现，只有当机体内的CTLA4一直维持在某一水平，其诱导移植物特异性免疫耐受的能力才最明显。说明，直接应用CTLA4纯品不但难度较大，而且效果有限。

本发明的目的是提供一种用CTLA4Ig重组基因转染的异体皮肤，用于覆盖、封闭烧伤创面。