[发明专利]微柱凝胶法血小板血型抗原抗体检测技术和试剂盒

说明书

本项发明属医学生物技术生物制品领域(以下简称微柱凝胶血小板配型技术)，本发明在世界上首次将微柱凝胶红细胞抗原抗体检测技术与红细胞间接血凝试验结合，建立了血小板血型配型的试验技术方法和制备了试剂盒，同时也可用于血小板血型检定，血小板抗体筛选，检测及确定试验。

血小板输血前应该进行配型试验，即检测病人(受血者)血清是否存在供者血小板相应的同种异体血型抗体，阴性结果表明受血者血清不存在该血小板的抗体，称之供者受者血小板血型相容，该血小板输入该病人体内是安全的，不会被排斥，不会引起其它免疫病理反应；阳性结果则表明受者血清中存在该血小板相应抗体，与供者血小板血型不相容，将会发生排斥反应等，不能将该血小板输给病人。血小板血型配型的意义即为病人选择血型相容的供者血小板。但迄今为止，血小板配型试验并没有成为临床血小板输血前的常规检测项目，其原因是没有能在数分钟内可以完成的快速简单的易于标准化的血小板血型检测方法。

血小板细胞膜同种异体抗原分二类，第一类为血小板和其它细胞共有的抗原；ABH抗原和HLA-I类抗原；第二类抗原为血小板特异性抗原。血小板同种异体抗原抗体反应引起的临床综合症主要有：1、胎儿及新生儿同种免疫血小板减少症；2、输血后紫癜；3、血小板输血无效症；4、免疫血小板减少症等等。对这些病症的检验预防和治疗都需要血小板血型的检测技术。血型相容的血小板输血是有效地治疗手段。

本发明微柱凝胶血小板配型技术，其微柱凝胶反应不同于传统的血凝反应，传统的血凝反应是红细胞抗原抗体在液体介质中，在玻片上或试管中进行，而微柱凝胶反应是在微柱体积中的凝胶介质中进行的血凝反应。微柱凝胶技术比较传统的血凝技术敏感性强，结果易于判定和较长期保存，特别是操作简单，省略了洗涤过程，试验在更少时间内完成。微柱凝胶技术目前在世界先进国家已广泛应用于红细胞抗原抗体检测的红细胞血型血清学检测中。本发明是世界上首次将目前微柱凝胶试验做以修改，用于血小板血型配型等血小板抗原抗体反应的试验中，能够彻底解决血小板血型检测中长期以来始终未能解决的问题。

由于血小板血型在临床和输血实践中的重要意义，因此已有不少血小板血型检测技术，但都未能成为临床常规试验，除ABO血型可以通过检测受者、供者红细胞确定其两者血小板ABO血型的相容性，在临床和输血实践中，迄今为止还很难应用现有的技术对每一次血小板输血进行应该常规进行的配型试验。目前已存在的血小板血型检测技术有：血小板免疫荧光试验、酶联免疫吸咐试验；混合被动血凝技术、混合细胞粘附试验(固相技术)、特异的单克隆抗体对血小板抗原固定试验等，这此试验的操作程序都比较复杂，需要时间长，有的所需设备仪器昂贵。所形成的事实迄今为止在全世界血小板血型配型都没有成为临床血小板输血的常规检测项目。

本发明微柱凝胶免疫检测一血小板配型技术的程序是：1、制备指示红细胞：O型健康人红细胞与抗人球蛋白致敏，制备成标准的指示红细胞试剂；2、将指示红细胞与病人(血小板输血受者)血清孵育1～5分钟之内均可；3、将待输的血小板指示红细胞依次加入微管凝胶反应腔中，离心1分钟1，000／rpm，取出观察结果见附图(附图所示微柱凝胶免疫反应格局，表明含O型红细胞-抗人IgG加病人血清的微柱凝胶管，5个管均呈阳性(4⁺～1⁺)，含O型红细胞-抗人IgG加健康人血清的微柱凝胶管呈阴性“-”，即阴性对照成立)。阳性以“±至4⁺”表示，指示红细胞捕获的血清中抗体与血小板特异性结合，离心后指示红细胞与血小板复合物浮于凝胶表面或胶中，该血小板输入该病人体内必然引起排斥和／或其它免疫病理反应，表明该病人与待输血小板血型不相容，即病人血清中存在待输血小板的相应抗体；阴性结果以“-”表示，指示红细胞上抗体与血小板未发生反应，指示红细胞沉淀于微管中凝胶尖底部，表明该病人血清中没有该血小板相应的抗体，两者血小板血型相容，该血小板可以输给该病人。

本发明用于血小板血型检测：指示红细胞与已知特异性的血小板抗体经孵育结合后，与被测血小板依次加入微柱凝胶中，阳性结果即表明该特异性抗体相应的血小板血型。

本发明用于病人血小板抗体筛选试验：用随机二人份混合血小板检测病人血清，如发生微柱凝胶试验阳性反应，表明病人血清中存在血小板抗体。